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通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒产品说明书(中文版)

点击次数:362    发布时间:2022/8/4 14:49:21

· 上 传 者: 上海极威生物科技有限公司

· 上传时间:2022/8/4 14:49:21

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· 所属分类:应用方法

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· 资料简介: 通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒产品说明书(中文版)

 

主要用途

 

通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂是一种旨在X-Gal为底物,通过组织/细胞内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达,催化生成深蓝色的沉积产物,从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作为细胞复制性衰老replicative senescence)的分子特征来识别和探测衰老细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于细胞生物学研究。其适用于各种人体和动物细胞、活体组织以及冰冻组织切片检测。产品即到即用,性能稳定,参数优化,着色敏感。

  

技术背景

 

细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期,表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征,尤其在酸性条件下,细胞内β-半乳糖苷酶活性增加,而成为细胞衰老的生物学标记。

 

产品内容

 

清理液(Reagent A)  毫升

固定液(Reagent B 毫升

酸性液(Reagent C 毫升

稀释液(Reagent D 毫升

染色液(Reagent E 毫升

产品说明书       x1

 

保存方式

 

保存染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里其余的保存在4℃冰箱里;稀释液(Reagent D)和染色液(Reagent E)用铝箔封裹,避免光照;有效保证6

 

用户自备

 

2毫升离心管:用于配制染色工作液

15毫升锥形离心管:用于配制染色工作液

恒温培养箱:用于染色孵育

切片仪:用于石蜡或冰冻切片

光学显微镜:用于观察染色后的细胞

 

 

 

 

 

实验步骤

 

一、 细胞染色

 

操作一、25cm2细胞培养瓶染色

 

实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E从-20的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液(Reagent D2毫升离心管,加入xx微升染色液(Reagent E,混匀后,放进37℃恒温水槽里预热,标记为染色工作液。然后进行下列操作:

 

1. 小心抽去25cm2细胞培养瓶里的培养液

2. 小心加入xx毫升清理液(Reagent A,清洗生长中的细胞表面

3. 小心抽去清理液

4. 小心加入xx毫升固定液(Reagent B,覆盖整个生长表面

5. 在室温下孵育5分钟

6. 小心抽去固定液

7. 小心加入xx毫升酸性液(Reagent C,清洗细胞表面

8. 小心抽去酸性液

9. 重复实验步骤78两次

10. 小心加入xx毫升预热的染色工作液,覆盖整个细胞表面

11. 放进37培养箱,孵育3小时至16小时,或细胞呈现蓝色(注意:避免液体蒸发

12. 在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞,呈现蓝色

 

操作二、24孔细胞培养板染色

 

实验开始前,将试剂盒里的染色液(Reagent E从-20的冰箱里取出,放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液(Reagent D15毫升锥形离心管,加入xx微升染色液(Reagent E,混匀后,放进37℃恒温水槽里预热,标记为染色工作液。然后进行下列操作:

 

1.小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

2.每孔加入xx微升清理液(Reagent A,清洗生长中的细胞表面

3.小心抽去每孔里的清理液

4.每孔加入xx微升固定液(Reagent B,覆盖整个生长表面

5.在室温下孵育5分钟

6.小心抽去固定液

7.每孔加入xx微升酸性液(Reagent C,清洗细胞表面

8.小心抽去酸性液

9.重复实验步骤78一次

10.每孔加入xx微升预热的染色工作液,覆盖整个细胞表面

11.放进37培养箱,孵育3小时至16小时,或细胞呈现蓝色(注意:避免液体蒸发

12.在光学显微镜下观察和计数:表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞,呈现蓝色

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