全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒产品说明书（中文版）

点击次数：394 发布时间：2022/8/4 14:47:28

· 上传者：上海极威生物科技有限公司

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· 所属分类：应用方法

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· 资料简介： 产品说明书（中文版）

主要用途

全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过组织内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达，催化生成深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的组织细胞分布，作为细胞复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来识别和探测衰老组织的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于细胞生物学研究。其适用于各种人体和动物活体（in vivo）检测。产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感。

技术背景

细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，尤其在酸性条件下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，而成为细胞衰老的生物学标记。全组织（WHOLE MOUNT或EN BLOC）原位染色时间真实反应转染效果，组织形态维持良好，同时后续使用石蜡切片存档保存成为可能。

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

固定液（Reagent B）毫升

酸性液（Reagent C）毫升

稀释液（Reagent D）毫升

染色液（Reagent E）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀释液（Reagent D）和染色液（Reagent E），用铝箔封裹，避免光照；有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液

恒温培养箱：用于染色孵育

切片仪：用于石蜡或冰冻切片

光学显微镜：观察染色后的组织细胞

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到15毫升离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，置入暗室里，室温下，标记为染色工作液。然后进行下列操作：

1．准备1个6孔细胞培养板

2．放进新鲜切除的动物组织样本（注意：建议组织大小为0.5厘米厚，1厘米长；如果过大，刀切处理一下）

3．将组织压平

4．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗组织样本

5．小心抽去清理液

6．小心加入xx毫升固定液（Reagent B），浸没整个组织

7．在4℃条件下孵育2小时

8．小心抽去固定液

9．小心加入xx毫升酸性液（Reagent C），清洗组织样本

10．在室温下孵育15分钟

11．小心抽去净化液

12．重复实验步骤9至11一次

13．小心加入xx毫升染色工作液，浸没整个组织

14．放进37℃培养箱，孵育16小时，避免光照

15．后续石蜡切片（6微米厚）或冰冻切片（10微米厚）

16．在光学显微镜下观察和计数：表达β- 半乳糖苷酶活性的组织为阳性，呈现蓝色

注意事项

1．本产品为10次（10个样本）操作

2．操作时须戴手套

3．使用时，避免污染母液，否则出现絮状沉淀，影响实验效果

4．原始组织大小可以1厘米厚、2厘米长进行染色，但建议越小越佳

5．本产品的参数：固着剂种类和浓度、pH、生色底物的选择和浓度等达到*优化

6． 染色工作液避免光照

7．用户根据实际需求，按比例配制试剂用量

8．染色孵育过程，避免光照

9．组织β-半乳糖苷酶活性强，孵育3小时即显示阳性；组织β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24小时

10．组织染色*长孵育时间为24小时

11．本产品染色敏感，甚至对于微弱表达的酶活性仍然显色清晰；用户可以根据实际情况调整孵育时间和染色工作液浓度，使染色恰到好处

12．孵育时避免液体蒸发

13．组织呈现蓝色的部位为衰老组织特异性β-半乳糖苷酶活性的地方

14．全组织染色存在其染色不均匀、组织内部染色渗透困难等局限

15．染色后的后续处理的切片样品可以长期保存，同样须避免光照

16．本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品

上海极威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，主营产品有elisa试剂盒，大鼠elisa试剂盒，小鼠elisa试剂盒，动物血清，细胞株，标准品，生化试剂盒等。

实验代做服务有酶联免疫ELISA检测、生化测试、液相气相检测、Icp-MS测试、载体构建、RACE、全基因合成、线粒体测序、荧光定量PCR、基因克隆、定点突变、染色体步移、基因组全序列获取、环境微生物多样性、微生物基因组测序、微生物菌种鉴定、甲基化分析服务等。极威生物秉承以产品质量为根本，以市场需求为导向，以为客户创造价值为己任的精神，致力于发展中国的科研事业。

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