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点击次数:454 发布时间:2021/6/28 11:01:09
· 上 传 者: 上海极威生物科技有限公司
· 上传时间:2021/6/28 11:01:09
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· 所属分类:应用方法
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· 资料简介: 本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断 人1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品 1. 酶标仪(450nm) 2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。 3. 预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。 4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称 96孔配置 48孔配置 备注 微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 无 标准品 0.3mL 0.3mL 无 样本稀释液 6mL 3mL 无 检测抗体-HRP 10mL 5mL 无 20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释 底物A 6mL 3mL 无 底物B 6mL 3mL 无 终止液 6mL 3mL 无 封板膜 2张 2张 无 说明书 1份 1份 无 自封袋 1个 1个 无 注:标准品浓度依次为:48、24、12、6、3、0 ng/mL. 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。 洗板方法 1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。 2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。 操作步骤 1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL; 3. 待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL; 4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。 6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。 尊敬的客户: 您好!上海极威生物科技有限公司(Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.)成立于上海,是一家专业从事“产品研发、市场销售、技术服务”为一体的高科技生物技术公司。极威生物依托国内外技术研发人才的优势,由留美资深科学家与数位国内多年从事生物领域研究的博士、硕士等高校生物领域研究人员共同创立,在科学研究和医疗检测领域享有极高的声誉,经过多年的努力发展已成为专业供应各类生物科研用品的公司,长期专注于生物领域,旗下产品种类众多。极威生物秉承以产品质量为根本,以市场需求为导向,以为客户创造价值为己任的精神,致力于发展中国的科研事业。力求为我国生物科技事业提供更好的、更专业性的技术服务和科研产品。自公司成立以来,公司的销售额保持高速增长,企业规模不断扩大,研发产品包括elisa试剂盒,生化试剂盒,动物血制品,抗体,标准品,生化试剂,实验耗材等10万余种类,公司长期致力于elisa试剂盒、生化试剂盒的研发,为客户提供生化试剂盒、ELISA试剂盒、技术服务等一系列实验代测服务。 实验代做服务:酶联免疫ELISA、生化测试、液相气相检测、Icp-MS测试、载体构建、RACE、全基因合成、线粒体测序、荧光定量PCR、基因克隆、定点突变、染色体步移、基因组全序列获取、环境微生物多样性、微生物基因组测序、微生物菌种鉴定、甲基化分析服务等,公司本着“质量,专业服务”的原则,致力于为用户提供高性价比的试剂盒和检测服务。
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