禽流感病毒（AIV）ELISA试剂盒说明书@公司新闻

点击次数：603 发布时间：2020/11/9 14:19:00

· 上传者：上海极威生物科技有限公司

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· 所属分类：应用方法

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· 资料简介：

11月9日报道，关于禽流感病毒（AIV）elisa试剂盒说明书@公司新闻介绍称，本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断，检测原理试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被禽流感病毒抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中禽流感病毒（AIV）的存在与否。

禽流感病毒（AIV）ELISA试剂盒说明书@公司新闻，样品收集、处理及保存方法：

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于 -20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

禽流感病毒（AIV）ELISA试剂盒说明书@公司新闻，自备物品：

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

禽流感病毒（AIV）ELISA试剂盒说明书@公司新闻，操作步骤：

1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。

2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各 50μL； 3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；

4. 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

禽流感病毒（AIV）ELISA试剂盒说明书@公司新闻，结果判断：

1. 试验有效性：阳性对照孔 OD 值平均值≥1.00；阴性对照孔 OD 值平均值≤0.15。

2. 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3. 阴性判断：样品 OD 值＜临界值（Cut off），样品为阴性

4. 阳性判断：样品 OD 值＞临界值（Cut off），样品为阳性

禽流感病毒（AIV）ELISA试剂盒说明书@公司新闻，试剂盒性能：

准确性：阳性对照孔 OD 值平均值≥1.00；阴性对照孔 OD 值平均值≤0.15，说明试验禽流感病毒（AIV）ELISA试剂盒说明书@公司新闻，结果有效。

1. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

2. 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。

3. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

4. 有效期：6 个月

禽流感病毒（AIV）ELISA试剂盒说明书@公司新闻，免责声明：

1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

ELISA试剂盒用户：为什么酶标仪读数时必须选用双波长？

极威生物解答：首先，酶标仪使用前务必预热10-15min，使测读结果更稳定。其次，ELISA实验采用双波长测定吸光度，可以排除单波长检测时的测定干扰（标本的浓度，干扰色等）。一般采用波长作为参照波长，在参照波长下，检测物的吸光值*小，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收；因此，双波长测定，可限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确度。

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