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点击次数:807 发布时间:2018/8/30 22:55:13
· 上 传 者: 上海极威生物科技有限公司
· 上传时间:2018/8/30 22:55:13
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· 所属分类:应用方法
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· 资料简介: 使用说明书 【产品名称】 通用名:口蹄疫A型抗体检测试剂盒(酶联免疫法) 英文名:Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A(ELISA) 【包装规格】 96T×1/盒(注:酶标板不可拆)、96T×2/盒(注:酶标板一块可拆、一块不可拆) 【预期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病,其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。 本试剂用于检测牛、羊血清中口蹄疫A型抗体,可用于口蹄疫A型疫苗免疫效果评价。 【原 理】 本试剂盒系由预包被口蹄疫A型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液酶标记物及其他配套试剂组成,应用阻断酶联免疫法(ELISA)原理检测牛、羊血清样本中口蹄疫A型抗体。实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育,样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原,阻断抗原与板的结合;经洗涤后,再加抗体工作液孵育;经洗涤后加入酶标记物孵育;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有口蹄疫A型抗体。 【试剂盒组成】 序号 名称 规格(96T×1) 规格(96T×2) 1. 酶标板 96T×1 96T×2 2. 酶标记物 (蓝盖) 5.5ml×1 11ml×1 3. 抗体工作液 (红盖) 5.5ml×1 11ml×1 4. 抗原液 (黑盖) 5.5ml×1 11ml×1 5. 20X浓缩洗涤液 40ml×1 40ml×2 6. 底物液A (白盖) 6ml×1 11ml×1 7. 底物液B (黑盖) 6ml×1 11ml×1 8. 终止液 (黄盖) 6ml×1 11ml×1 9. 阳性对照 (红盖) 1.0 ml×1 1.5 ml×1 10. 阴性对照 (绿盖) 1.0 ml×1 1.5 ml×1 11. 盖板膜 1张 2张 12. 自封袋 1个 1个 13. 说明书 1份 1份 【储存及有效期】 于2~8℃避光保存,有效期为12个月。 包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。 【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。 【样品准备】 1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。 2.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。 3.用已稀释的洗涤液将待检血清按64倍稀释(如5μl血清加入315μl洗涤液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。 【检验方法】 1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。 2.取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。 3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl,样品孔每孔加入稀释后的样品50μl;每孔再加入抗原液50μl(空白孔除外)。 注:加入抗原后样本稀释比例相当于1:128。 4.震荡混匀10秒,置37℃反应30分钟。 5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。 6.每孔加抗体工作液50μl(空白孔除外),置37℃反应30分钟。 7.洗涤,同步骤5。 8.每孔加酶标记物50μl(空白孔除外),置37℃反应30分钟。 9.洗涤,同步骤5。 10.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应15分钟。 11.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。 【参考值】 实验正常的情况下,阴性对照A值≥1.0,阳性对照A值≤50%×阴性对照A值。 【检验结果的解释】 1.PI(阻断率)=(1-样本A值/阴性对照孔平均A值)×100%,PI≥50%为阳性;PI<50%为阴性。 2.本实验检测结果为阳性时表明待检样本中含有口蹄疫A型抗体,且效价高于1:128,达到保护水平。 3.本实验检测结果为阴性时表明待检样本中不含有口蹄疫A型抗体,或效价低于1:128,未达到充足保护水平。 4.如需了解样本抗体的*终效价,可将样本进行梯度稀释,使PI≥50%的稀释比例即为该样本抗体的*终效价。 【试验方法的局限性】 该试验仅作为定性牛、羊血清中口蹄疫A型抗体,根据PI值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。 【注意事项】 1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。 2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。 3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。 4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以完全溶解。 5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。 6.用于检测的样品应保持新鲜。 7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。 8.不同批号试剂组分不得混用。
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