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人可溶程序性死亡分子-1(sPD-1)ELISA 检测试剂盒

人可溶程序性死亡分子-1(sPD-1)ELISA 检测试剂盒

价格:电议 型号:

原产地:中国大陆发布时间:2022/6/8 13:34:55

人可溶程序性死亡分子-1(sPD-1)ELISA 检测试剂盒;
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人可溶程序性死亡分子-1(sPD-1)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。

采购度:5

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详细内容

本公司6月8日13时37分报道:(http://www.app17.com/c110001/products/d11446708.html)

人可溶程序性死亡分子-1(sPD-1)ELISA 检测试剂盒

使用说明书

 检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验ELISA。往预先包被人可溶程序性死亡分子-1(sPD-1)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用   底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作 用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人可溶程序性死亡分子-1sPD-1呈正相关。用酶标仪在450nm  波长下测定吸光度OD,计算样品浓度。

 样品收集、处理及保存方法

1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3. 细胞上清液:3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于

-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 自备物品

1.酶标仪(450nm)

2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

3.37℃恒温箱

 操作注意事项

1. 试剂盒保存在 2-8℃,使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封低温干燥保存。


3. 预处理后的样本无需稀释,直接取 10μL 加样即可。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

 试剂盒组成

 

名称

96 孔配置

48 孔配置

备注

微孔酶标板

12 孔×8 条

12 孔×4 条

标准品

0.3mL

0.3mL

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2 张

2 张

说明书

1 份

1 份

自封袋

1 个

1 个

注:标准品浓度依次为:240、120、60、30、15、0 pg/mL.

 试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按 1:20 稀释,即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

 洗板方法

1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 1min 后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板 5 次。

2. 自动洗板机:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。

 操作步骤

1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回 4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL

3. 待测样本孔先加待测样本 10μL,再加样本稀释液 40μL

4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶HRP)标记的检测抗体  100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温 60min。

5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 也可用洗板机洗板

6. 每孔加入底物AB  50μL37℃避光孵育 15min


7. 每孔加入终止液 50μL15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

 结果判断

绘制标准曲线:在 Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD 值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

 试剂盒性能

1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值,大于等于0.9900。

2. 灵敏度:检测浓度小于 1.0 pg/mL。

3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性:板内变异系数小于 10%、板间变异系数小于 15%。

5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

6. 有效期:6 个月

 免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。


更新时间:2022/6/8 13:34:55

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