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3. 预处理后的样本无需稀释,直接取 10 μ L 加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 备注 |
微孔酶标板 | 12 孔×8 条 | 12 孔×4 条 | 无 |
标准品 | 0.3mL | 0.3mL | 无 |
样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
底物 A | 6mL | 3mL | 无 |
底物 B | 6mL | 3mL | 无 |
终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
封板膜 | 2 张 | 2 张 | 无 |
说明书 | 1 份 | 1 份 | 无 |
自封袋 | 1 个 | 1 个 | 无 |
注:标准品浓度依次为: 8、4 、2 、 1、0.5 、0 U/mL.
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释: 蒸馏水按 1: 20 稀释, 即 1 份的 20×洗涤 缓冲液加 19 份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 1min 后甩尽 孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板 5 次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。
操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条, 剩余板条用自封 袋密封放回 4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50 μ L;
3. 待测样本孔先加待测样本 10μL,再加样本稀释液 40 μ L;
4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记 的检测抗体 100 μ L ,用封板膜封住反应孔, 37℃水浴锅或恒温箱温 育 60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干, 每孔加满洗涤液,静置 1min,甩去 洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物 A 、 B 各 50 μ L, 37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入终止液 50 μ L, 15min 内, 在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
结果判断
绘制标准曲线: 在 Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应 OD 值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线, 按曲线方程计算各样
本浓度值。
试剂盒性能
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值,大于等于 0.9900。
2. 灵敏度:检测浓度小于 0.1 U/mL。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内变异系数小于10%、板间变异系数小于 15%。
5. 贮藏: 2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期: 6 个月
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所 产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作, 后果由实验者 承担。
本试剂盒只能用于科学研究, 不得用于医学诊断
更新时间:2024/5/24 11:45:35
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