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点击次数:881 发布时间:2021/6/24 18:03:24
细胞P38激酶总活性光度法定量检测试剂盒抑制剂筛选
1. 在96孔板上做好相应标记:背景、完全活性和待测抑制剂样品
2. 按下表加入试剂,进行样品预处理
内容物 | 空背景对照 | 样本背景 | 完全酶活性 | 待测抑制剂酶活性 |
缓冲液(Reagent C) | xx微升 | xx微升 | xx微升 | xx微升 |
阴性液(Reagent G) | xx微升 | xx微升 | xx微升 | —— |
待测抑制剂 | —— | xx微升 | ―― | xx微升 |
用户自备的纯化酶 | —— | —— | xx微升(1毫单位) | xx微升(1毫单位) |
96孔板每孔总量 | 空背景对照孔 (40微升) | 样本背景孔 (40微升) | 完全活性孔 (40微升) | 待测抑制剂样品孔 (40微升) |
轻轻摇动96孔板,混匀,放进30℃培养箱里孵育30分钟。然后进行下列操作 |
3. 分别移取xx微升缓冲液(Reagent C)到新的96孔板的所有孔里
4. 分别加入xx微升酶促液(Reagent D)
5. 分别加入xx微升反应液(Reagent E)
6. 分别加入xx微升底物液(Reagent F)
7. 轻轻摇动96孔板
8. 在30℃温度下孵育3分钟
9. 加入40微升上述预处理的待测样品
10. 即刻放进30℃酶标仪检测:测读30分钟
11. 抑制活性计算:
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