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ELISA 检测试剂盒#人精氨酸酶(Arg)ELISA 检测试剂盒使用说明书2022年推荐#技术新闻

点击次数:139   发布时间:2022/4/19 16:04:19

ELISA 检测试剂盒#人精氨酸酶(Arg)ELISA 检测试剂盒使用说明书2022年推荐#技术新闻

据技术部4月19日15时59分透露:(http://www.app17.com/c110001/products/d11345973.html)

检测原理

 

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人精氨酸酶(Arg)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻*底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人精氨酸酶(Arg)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样品收集、理及保存方法

 

1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

 

3. 细胞上清液:3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

 

4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于

 

-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品

1. 酶标仪(450nm)

 

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

 

3. 37℃恒温箱作注意事项

1. 试剂盒保存在 2-8℃,使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完*全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

 

3. 预处理后的样本无需稀释,直接取 10μL 加样即可。


 

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

 

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

 

剂盒组成

 

洗板方法

 

1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 1min 后甩尽

 

孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板 5 次。


 

名称

96 孔配置

48 孔配置

备注

微孔酶标板

12 ×8 条

12 ×4 条

标准品

0.3mL

0.3mL

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物 A

6mL

3mL

底物 B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2 张

2 张

说明书

1 份

1 份

自封袋

1 个

1 个

 

2. 自动洗板机:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。操作步骤

1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回 4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL;

 

3. 待测样本孔先加待测样本 10μL,再加样本稀释液 40μL;


注:标准品浓度依次为:50、25、12.5、6.25、3.125、0 ng/mL.

4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记

剂的准备

的检测抗体 100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温

20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按 1:20 稀释,即 1 份的 20×洗涤

育 60min。

缓冲液加 19 份的蒸馏水。

5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 次(也可用洗板机洗板)。

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。


 

7. 每孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的OD 值。

结果判断

 

绘制标准曲线:在 Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD 值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

 

剂盒性能

 

1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值,大于等于0.9900。

2. 灵敏度:**低检测浓度小于 0.1 ng/mL。

 

3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

 

4. 重复性:板内变异系数小于 10%、板间变异系数小于 15%。

 

5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

 

6. 有效期:6 个月免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

 

原创作者:上海极威生物科技有限公司

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